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同型半胱氨酸測定試劑盒的檢測原理

來源:http://m.kmtstz.com/news1029488.html 發(fā)布時間:2024/7/18 16:52:00

同型半胱氨酸(HCY)測定試劑盒的檢測原理主要基于化學反應來定量測定血清中同型半胱氨酸的含量。以下是幾種常見的檢測原理:

1. 酶法

原理概述:酶法通過一系列酶促反應將同型半胱氨酸(Hcy)轉化為可檢測的物質,進而測定其含量。

具體步驟:氧化型Hcy首先被轉化成游離Hcy。

游離Hcy在CBS(胱硫醚-β-合成酶)的催化下和絲氨酸反應生成L-胱硫醚。

L-胱硫醚在CBL(胱硫醚裂解酶)催化下又生成Hcy、丙酮酸和NH3。

該循環(huán)反應生成的丙酮酸可以用乳酸脫氫酶(LDH)和NADH(還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)檢測到。

NADH轉變成NAD+的速率與樣品中Hcy含量成正比,通過檢測NADH的吸光度變化率來計算Hcy的含量。

2. 循環(huán)酶法

原理概述:基于小分子捕獲技術(SMT)的循環(huán)酶法通過一系列酶促反應放大檢測信號,從而精確測定Hcy含量。

具體步驟:氧化型同型半胱氨酸在TCEP(三乙羧乙基膦)作用下轉化為游離型Hcy。

游離型Hcy與共價底物S-腺苷甲硫氨酸(SAM)催化反應形成蛋氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)。

SAH被SAH水解酶水解成腺苷和Hcy,形成的Hcy可以循環(huán)加入反應,從而放大了檢測信號。

生成的腺苷立即水解為次黃嘌呤和氨,氨在谷氨酸脫氫酶的作用下使NADH轉化為NAD+,樣本中的Hcy濃度與NADH的變化成正比。

3. ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附試驗)

原理概述:ELISA法采用雙抗體一步夾心法,通過抗原抗體反應和酶促顯色反應來測定Hcy含量。

具體步驟:往預先包被人同型半胱氨酸(Hcy)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP(辣根過氧化物酶)標記的檢測抗體。

經(jīng)過溫育并徹底洗滌后,用底物TMB(四甲基聯(lián)苯胺)顯色。

TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。

顏色的深淺和樣品中的Hcy呈正相關,用酶標儀在特定波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

注意事項

不同品牌和型號的試劑盒檢測原理可能略有差異,具體操作時應參照試劑盒說明書進行。

樣本采集和處理應嚴格按照要求執(zhí)行,以保證檢測結果的準確性。

試劑盒應存放在適宜的溫度和濕度條件下,避免過期或變質影響檢測結果。

綜上所述,同型半胱氨酸測定試劑盒的檢測原理多種多樣,但核心都是通過化學反應將Hcy轉化為可檢測的物質,并通過特定的檢測方法(如吸光度測定)來定量測定其含量。